专利分类
专利分类

与急性胰腺炎相关的代谢标志物专利

专利号:201910298608.X

销售价
22000.00
与急性胰腺炎相关的代谢标志物专利二维码
  • 累计销量0
  • 浏览次数34
  • 累计评论0
首页

专利名称:与急性胰腺炎相关的代谢标志物

技术领域:化学/物理性质测试

IPC主分类号:G01N30/88

申请号:CN201910298608.X

公开日:2019-06-21

说明书

一种与急性胰腺炎相关的代谢标志物

技术领域

[0001] 本发明属于生物技术领域,涉及一种与急性胰腺炎相关的代谢标志物。

背景技术

[0002] 急性胰腺炎(acute pancreatitis,A P)为胰酶异常激活后对胰腺及其周围脏器产生自身消化作用而引起的炎症性疾病。其发病率在急腹症中占第3~5位,在不同的国家和地区发病率不同,且呈增加趋势。
[0003] 临床上,大多数AP患者的的临床经过、预后差异甚大,部分患者病程呈自限性,约20%~30%患者临床经过凶险,可发生急性肺损伤、急性肾功能衰竭、多器官功能障碍(Multiple organ dysfunction Syndrome,MODS)、甚至多器官功能衰竭(Multiple organ failure,MOF)等多种严重并发症,其总体死亡率达5%~10%。AP患者在临床中常分为轻症急性胰腺炎(mild acute  pancreatitis,MAP)、重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)两类,约10%的AP患者在发病后发展为SAP,SAP患者死亡的风险明显高于MAP患者。SAP患者常由于其内分泌功能的紊乱,包括胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等分泌异常,常常会引起高血糖、高脂血症等代谢紊乱的临床表现,继发的高血糖、高血脂成为与AP严重程度密切相关的指标。因此,在SAP的发病机制中,对代谢紊乱有影响的因素也可能影响疾病的进程。
[0004] 代谢组学是研究生物体系受刺激或扰动后其代谢产物-内源性代谢物质种类、数量及其变化规律的科学。组学主要应用NMR,HPLC-MS/MS,GC-MS等现代分析技术测定生物体液(如尿液、血浆、组织提取液等)中的内源性代谢产物,考察生物体系受到刺激或扰动后其内源性代谢产物的变化,研究生物体系代谢途径,经过多元统计分析,确定内源性小分子代谢物成分的变化模式,对代谢产物谱进行动态追踪,从而反映出中毒或代谢损害引起的细胞功能异常。有研究表明,在疾病形成过程中小分子代谢物发挥着巨大的作用。将代谢组学研究与疾病发生及药物治疗相结合,筛选与疾病发生与治疗效果相关的代谢物,对于实现疾病的个性化治疗具有重要的意义。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于发现与急性胰腺炎及其治疗应答相关的代谢物标志物,通过检测所述代谢物标志物的含量,可以判断急性胰腺炎患者是否患有急性胰腺炎以及对药物治疗的反应,从而为患者的个性化治疗提供指导。
[0006] 本发明的第一方面提供了检测代谢物的试剂在制备诊断急性胰腺炎的产品中的应用,所述代谢物为LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))。
[0007] 进一步,所述产品包括通过用色谱、光谱或质谱仪/光谱法检测代谢物的含量的试剂。
[0008] 进一步,所述色谱检测为超高效液相层析检测。
[0009] 本发明的第二方面提供了一种诊断急性胰腺炎的产品,所述产品包括检测LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))含量的试剂。
[0010] 本发明的第三方面提供了检测代谢物的试剂在制备预测药物治疗急性胰腺炎的治疗应答产品中的应用,所述代谢物为LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))。
[0011] 本发明的第四方面提供了LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))在筛选治疗急性胰腺炎的候选药物中的应用。
[0012] 进一步,筛选治疗急性胰腺炎的候选药物的步骤包括:
[0013] 将待筛选物质加入含有LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))的培养体系,和[0014] 检测所述体系中LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))的含量,
[0015] 若待筛选物质可减少LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))的含量,则表明该待筛选物质是治疗急性胰腺炎的候选药物。
[0016] 本发明的第五方面提供了LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))在制备预测药物治疗急性胰腺炎的治疗应答产品中的应用。
[0017] 本发明的第六方面提供了LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))在构建预测急性胰腺炎的计算模型中的应用。
[0018] 本发明的第七方面提供了LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))在构建预测药物治疗急性胰腺炎的治疗应答的计算模型中的应用。
[0019] 本发明的第八方面提供了LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))在制备治疗急性胰腺炎的药物中的应用。
[0020] 本发明的优点和有益效果:
[0021] 本发明首次发现了与急性胰腺炎以及药物治疗效果相关的代谢物,通过检测代谢物的含量,可以判断受试者是否患有急性胰腺炎以及急性胰腺炎患者对药物治疗的应答反应,有利于急性胰腺炎患者的个性化治疗。

附图说明

[0022] 图1是小鼠血清淀粉酶含量图。
[0023] 图2是小鼠胰腺组织图。
[0024] 图3是小鼠胰腺组织病理改变图。
[0025] 图4是QC样本正负离子(ES+/-)模式BPI和TIC图,其中,图A是正离子(ES+)模式BPI图,图B是正离子(ES+)模式TIC图,图C是负离子(ES-)模式BPI图,图D是负离子(ES-)模式TIC图。
[0026] 图5是OPLS-DA分析图。

具体实施方式

[0027] 为了评估代谢物能否作为急性胰腺炎的标志物,本发明基于质谱色谱联用技术,对使用药物治疗急性胰腺炎受试者的样本的代谢组学进行研究,寻找正常与疾病,以及疾病治疗前后的代谢物的变化,建立重要差异代谢列表,研究其所表征的与急性胰腺炎相关的生物信息,并从中进一步筛选出关键代谢物,从而使以一种改进的方式并在疾病的早期阶段筛查和诊断急性胰腺炎成为可能,并且允许更准确和可靠地预测患有急性胰腺炎的患者是否可能对药物疗法有反应。
[0028] 通常,由于生物标志物可能将两种或更多种生物状态彼此区分,因此它是一种有价值的工具,作为正常生物过程、致病过程的指示物或作为药物干预的反应。代谢物是低分子化合物(<1kDa),小于大多数蛋白质、DNA和其它大分子。蛋白质活性的小变化导致生化反应及其代谢物(=代谢生物标志物,着眼于身体的代谢)的巨大变化,其浓度、流量和转运机制对疾病和药物干预敏感。这可能获得反映遗传学和环境因素(例如:营养、身体活动、肠微生物和药物)的生理物质和病理生理物质的个体概况。因此,与如作为生物标志物而不是代谢生物标志物的蛋白质或激素相比较,代谢生物标志物提供了更全面的信息。
[0029] 本文使用的术语“代谢物生物标志物”或短的“生物标志物”被定义为适合作为急性胰腺炎存在和状态的指标化合物,这种化合物是哺乳动物体内的代谢过程中出现的代谢物或代谢化合物。术语“生物标志物”和“代谢生物标志物”通常在本发明的上下文中同义使用,并且通常是指一种代谢物的量或两种或更多种代谢物的含量或比率。因此,术语“代谢物生物标志物”或“生物标志物”也包括两种或更多种代谢物之间的含量或比率。
[0030] 术语“含量”通常是指样品(例如:血液样品)中代谢物的浓度,通常以mol/L给出,但也可用本领域通常使用的其它单位计量,例如g/L,mg/L或其他。术语“比率”通常是指各个实施方案中指定的代谢物的量的比率。
[0031] 本发明通过代谢组学测序以及生物信息学分析,首次发现了LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))在不同的组之间呈现显著性差异。LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))化合物ID为HMDB11478,分子式为C23H42NO7P,在急性胰腺炎中含量显著增加,使用药物治疗后,该代谢物的水平显著降低,且与正常对照无显著性差异。
[0032] 在本发明中,可以使用本领域已知的用于这样的代谢物的任何合适方法来分析生物样品中的特定代谢物。使用定量分析方法包括但不限于色谱法、光谱法和质谱法。典型的质谱仪由其将样品内的分子离子化的来源和用于检测电离分子或分子片段的检测仪组成。常用来源的非限制性实例包括电子冲击、电子喷雾电离(ESI)、大气压化学电离(APCI)、大气压光电离(APPI)、基质辅助激光解析电离(MALDI)、表面增强激光解析电离(SELDI),及其衍变。常见的质谱分离和检测系统可以包括四级、四级离子阱、线性离子阱、飞行时间(TOF)、扇形磁场、离子回旋加速器(FTMS)、轨道离子阱,及其衍变和组合。FTMS优于其他基于MS的平台的优势是其高分辨力,允许分离差异只在数百道尔顿的代谢物,许多这样的将被较低分辨的仪器错过。
[0033] 色谱可以包括GC,LC,HPLC和UHPLC;光谱可包括UV/Vis,IR和NMR;质谱分析器/光谱可以包括ESI-QqQ,ESI-QqTOF,MALDI-QqQ,MALDI-QqTOF和MALDI-TOF-TOF。更优选地,质量分析器/光谱分析包括四极杆质量分析器,离子阱质谱分析器,TOF(飞行时间)质量分析器、轨道阱质量分析器、磁式扇形质量分析器、静电场扇形质量分析器(Electrostatic Sector Mass Analyzer)、离子回旋共振(ICR)以及质量分析器的组合(包括单四极杆(Q)和三重四极杆(QqQ),QqTOF,TOF-TOF,Q轨道阱)。优选是使用FLA-和HPLC-串联质谱法。
[0034] 其中,GC=气相色谱,CE=毛细管电泳,LC=液相色谱,HPLC=高度液相色谱,UHPLC=超高效液相色谱,UV-Vis=紫外可见,IR=红外,NIR=近红外,NMR=核磁共振,ESI=电子喷雾电离,MALDI=基质辅助激光解吸/电离,TOF=飞行时间,APCI=大气压化学电离,QqQ=三重四极杆配置(也称为Qlq2Q3(Q1和Q3四极杆是质量过滤器,q2是无质量分辨四极杆(no mass-resolving quadrupole)))。
[0035] 在本发明中,也可以通过特定化学或生物学试验来测定所述至少一种代谢物。所述试验将包含允许特异性检测样品中所述至少一种代谢物的工具。优选地,所述工具能够特异性识别代谢物的化学结构,或基于其与其他化合物反应的能力或其在生物学读出系统中诱导响应(例如报道基因的诱导)的能力特异性鉴定代谢物。能够特异性识别代谢物的化学结构的工具优选为抗体,或特异地与化学结构如受体或酶相互作用的其他蛋白质。例如可以使用代谢物作为抗原通过本领域所熟知的方法获得特异抗体。如此处所指的抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体,及其片段,如能够结合抗原或半抗原的Fv、Fab和F(ab)2片段。本发明也包括人源化的杂交抗体,其中显示想要的抗原特异性的非人供体抗体的氨基酸序列与人受体抗体的序列组合。此外,还包括的是单链抗体。供体序列通常至少包括供体的抗原结合氨基酸残基,但也可包含供体抗体的其他结构和/或功能相关的氨基酸残基。此类杂合体可以通过本领域所熟知的几种方法来制备。能够特异性识别代谢物的合适的蛋白质优选为酶,其参与所述代谢物的代谢转化。所述酶可以使用代谢物作为底物或可以转化底物成为代谢物。此外,所述抗体可以用作产生特异性识别代谢物的寡肽的基础。这些寡肽将例如包含酶的结合结构域或接受所述代谢物的袋。基于合适的抗体和/或酶的试验可以是RIA(放射免疫测定)、ELISA(酶联免疫吸附测定)、夹层酶免疫试验、电化学发光夹层免疫测定(ECLIA)、解离增强镧系荧光免疫测定(dissociation-enhanced lanthanide fluoro immuno assay,DELFIA)或固相免疫试验。此外,代谢物也可基于它与其他化合物反应的能力(即通过特异的化学反应)得到鉴定。合适的反应为本领域所熟知,并优选地包括酶促反应、酶促分光光度测定方法、荧光分光光度法和荧光;化学发光。可以使用其他检测方法如毛细管电泳和比色法。另外,代谢物可因其在生物学读出系统中诱导响应的能力而得到测定。生物学响应将检测为表示样品中包含的代谢物的存在和/或量的读出。生物学响应可以是例如,基因表达的诱导,或细胞或生物体的表型响应。
[0036] 在本发明中,生物样本取自哺乳动物,优选为小鼠,大鼠,豚鼠,狗,小型猪或人,最优选为人。生物样品优选是血液,然而,允许根据本发明进行测定的本领域技术人员已知的任何其他生物样品也是合适的。血液样品通常是全血,血清或血浆。
[0037] 尽管使用一种代谢物对于诊断急性胰腺炎疾病就足够了,但使用一种或多种,两种或多种,三种或多种,或四种或多种这样的代谢物包括在本发明内,并且在许多情况中,这是优选的。可以分析代谢物,并且以任意组合用于诊断。
[0038] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件。
[0039] 实施例1中药对急性胰腺炎的治疗
[0040] 1、实验材料
[0041] 1.1实验主要材料
[0042] 表1使用材料清单
[0043]
[0044]
[0045] 1.2实验主要器材
[0046] 手术器械:无菌显微弯镊2把,眼科剪2把,持针钳1把,手术刀1把。
[0047] 其他:干棉球,医用棉签,缝合线,手术灯,手术板,固定橡皮筋,酒精棉,无菌纱布,无菌培养皿,生理盐水,10mL注射器,1mL注射器,4号缝合针。
[0048] 2、实验方法
[0049] 2.1动物分组
[0050] 30只SPF级C57BL/6小鼠,雄性,8周龄,20g左右,适应性饲养1周后随机分为五组,每组6只,分组情况如表2所示:
[0051] 表2小鼠分组情况
[0052]
[0053] 2.2药物配制
[0054] 表3药物配制
[0055]
[0056] 2.3动物模型构建及药物处理
[0057] 实验小鼠制模前禁食12h,不禁水。对照组注射等体积生理盐水,其余各组接受7次腹腔注射雨蛙肽(50μg/kg,每次间隔1h),最后一次注射完后,腹腔注射30mg/kg剂量的LPS,制备AP模型。大黄酸治疗组、和厚朴酚治疗组、大黄酸+和厚朴酚治疗组于首次注射雨蛙肽后1h、5h、9h分别尾静脉注射0.2%大黄酸4mg/kg,腹腔注射和厚朴酚5mg/kg。
[0058] 2.4血清和胰腺的收集
[0059] 模型构建完成后,即首次注射雨蛙肽7h后,小鼠眼眶采血。于首次腹腔注射雨蛙肽12h后在无菌状态下进行小鼠眼球取血,全血室温放置2h或4℃过夜后,6000r/min,离心
5min,收集血清,-80℃保存备用。同时取胰腺组织,拍照,在同样的位置将胰腺组织分为2份,1份用福尔马林溶液固定,1份直接液氮速冻后放-80℃冻存备用。
[0060] 2.5血清淀粉酶的检测
[0061] 采用上海酶联生物科技有限公司的小鼠淀粉酶(AMS)试剂盒(ELISA)检测血清淀粉酶含量。
[0062] 1)从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条。
[0063] 2)加样:每孔各加入标准品或待测样品50μL,加酶标抗体工作液50μL。将反应板充分混匀后置37℃恒温箱温育60min。
[0064] 3)洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
[0065] 4)每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
[0066] 5)每孔加入50μL终止液,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
[0067] 6)以标准品为横坐标,OD值为纵坐标,画出标准曲线。根据样品OD值在该曲线图上查出相应样本中待测因子蛋白含量。
[0068] 2.6胰腺组织的HE染色
[0069] 1)石蜡切片制作
[0070] ①切片:包埋后的组织块经修整后,用切片机切成5μm的石蜡带。
[0071] ②贴片:将组织石蜡块在50℃温水中展片,然后用处理干净的载玻片捞片,组织带可黏在载玻片上。
[0072] ③烤片:60℃恒温箱内烤片2h。
[0073] 2)脱蜡和水化
[0074] ①60℃恒温箱中烘烤20min。
[0075] ②二甲苯中浸泡10min,更换二甲苯后再浸泡10min;
[0076] ③无水乙醇中浸泡5min;
[0077] ④95%乙醇中浸泡5min;
[0078] ⑤70%乙醇中浸泡5min;
[0079] ⑥50%乙醇中浸泡5min;
[0080] ⑦纯水中浸泡5min;
[0081] 3)苏木素染色5min;盐酸乙醇分化5s;
[0082] 4)自来水返蓝15min。
[0083] 5)伊红染色5min。
[0084] 6)95%乙醇快速清洗2次。
[0085] 7)无水乙醇2min快速脱水,二甲苯透明5min*3。
[0086] 8)树胶封片,镜检拍照。
[0087] 3、实验结果
[0088] 3.1小鼠血清淀粉酶含量
[0089] 7h,12h小鼠血清淀粉酶含量如图1所示(*:与对照组相比,p<0.05,**:与对照组相比,p<0.01,#:与模型组相比,p<0.05,##:与模型组相比,p<0.01),首次腹腔注射雨蛙肽7h后,测得胰腺炎小鼠模型中血清淀粉酶含量显著高于空白对照组和给药治疗组,说明小鼠胰腺炎模型构建成功,而大黄酸和厚朴酚力联合用药组的效果显著优于单独用药的效果。
[0090] 3.2小鼠胰腺组织图片
[0091] 首次注射雨蛙肽12h后,取胰腺组织拍照,结果如图2所示,相较空白对照组,模型组动物的胰腺组织有明显的水肿,大黄酸+和厚朴酚联合用药比单独使用这两种药物效果好,能够缓解胰腺炎模型小鼠的胰腺组织水肿现象。
[0092] 3.3HE染色结果
[0093] HE染色结果如图3所示,与空白对照组相比,胰腺炎模型组的细胞间间隙较大,且细胞核较多,说明炎症模型会导致巨噬细胞等聚集在炎症周围。大黄酸治疗组、和厚朴酚治疗组相比胰腺炎模型组,细胞间间隙有所减小,细胞核数目也减少了。大黄酸+和厚朴酚联合用药组相比胰腺炎模型组,能明显减少细胞核的数目,细胞间间隙也有所减小,说明联合用药能够缓解胰腺炎炎症。
[0094] 实施例2筛选与影响急性胰腺炎的相关的代谢物
[0095] 1、样本的收集
[0096] 本实验收集实施例中空白对照组、模型组以及大黄酸+和厚朴酚联合治疗组的小鼠组织样本各10例。
[0097] 2、实验信息
[0098] 2.1仪器及试剂
[0099] 表4试剂
[0100]
[0101] 表5仪器
[0102]
[0103] 2.2实验方法
[0104] 2.2.1代谢物提取
[0105] 1)取100mg组织,加入500μL的裂解液(MeOH:H2O=1:1);
[0106] 2)在组织破碎仪中打碎,6,500MHz,1min,振荡3次;
[0107] 3)涡旋混匀后,在-20℃冰箱中放置过夜;
[0108] 4)离心:4℃,13,000rpm,20min;
[0109] 5)取相同体积上清液冻干;
[0110] 6)加入100μL裂解液复溶,超声5min;
[0111] 7)离心:4℃,13,000rpm,20min;
[0112] 8)取上清液上机。
[0113] 2.2.2仪器参数
[0114] 1)液相条件
[0115] 柱温(℃):45
[0116] 样品温度(℃):4
[0117] 液相流速:0.35ml/min
[0118] A相:水+0.1%甲酸
[0119] B相:乙腈+0.1%甲酸
[0120] 表6液相条件
[0121]
[0122] 2)质谱条件
[0123] 在正离子采集模式下,Masslynx软件基于MSE功能对样品进行一级、二级质谱数据采集。毛细管电压:2.5kV,锥孔电压24V,离子源温度100℃,去溶剂气流速800L/h,锥孔气流速50L/h,14min内对m/z为50-1500Da的离子进行扫描,0.2s/循环。
[0124] 在负离子采集模式下,Masslynx软件基于MSE功能对样品进行一级、二级质谱数据采集。毛细管电压:2.5kV,锥孔电压25V,离子源温度100℃,去溶剂气流速600L/h,锥孔气流速10L/h,14min内对m/z为50-1500Da的离子进行扫描,0.2s/循环。
[0125] 2.2.3上机检测
[0126] 为了更好地采集数据,确保仪器的最佳状态,在正式样品上机前需要用QC样本做稳定性测试,一般将同一个QC样本重复进样10针左右,此样本为condition QC,待仪器稳定方可进样。每10针样本中间插入一个QC,确保仪器进样过程中的稳定性。
[0127] 3、实验结果
[0128] 3.1数据结果
[0129] 在本次实验中正离子共检出了15013个features、负离子共检出了10431个features。其中QC样本的BPI(base peak intensity,基峰图)和TIC(total ion Chromatogram,总离子流色谱图)如图4所示,图右上角表示峰强度,左上角标明样品名称。BPI图中的峰型比较窄、数量多,表明色谱分离效果好。
[0130] 3.2数据质控
[0131] 在仪器进行数据采集的过程中,将插在样品中间的QC样品做overlay,确定保留时间和峰强度基本保持不变;对QC样本进行PCA分析,主要是对数据进行降维分析,检测实验组间的差异性及组内的重复性,对QC样本的相关性进行分析,考察研究样本多次生物学实验的重复性,结果显示,在数据采集过程中,时间和峰强度基本保持不变;且QC样本相对集中在一起,不存在随时间变动的情况,任意两组重复实验共定量多肽强度值的Pearson相关系数均大于0.9,具有较好的一致性,说明实验仪器具有较好的稳定性。
[0132] 4、数据分析
[0133] 4.1PCA分析
[0134] 将获得的原始数据导入Progenesis QI(Waters)软件进行统计分析,首先对数据进行Lockmass的质量分数校正和保留时间的峰对齐,然后对样本进行分组,导入EZinfo软件进行差异代谢物的筛选。PCA分析是EZinfo软件分析的第一步,主要是对数据进行降维分析,可以检测实验组间的差异性及组内的重复性。在二维图中,取前两个主成分PC1,PC2来表示样本,空间分布差异越小,表示两个样本的数据越接近。重复性较好的实验,同一组内的不同样本应该聚集在一个相对集中的范围内,并可以与其他组的数据聚集区域区分开。
[0135] 4.2OPLS-DA(正交偏最小二乘法-判别分析)
[0136] 为了消除与分类不相关的噪音信息,同时也为了筛选导致分类差异的可信代谢物,选取OPLS-DA分析过滤与分类不相关的信号,即正交信号,获得OPLS-DA模型,对模型的质量用交叉验证法进行检验(即用一部分样本数据制作分组模型,另外一部分数据用来测试已分组的模型),得到的R2X和Q2分别代表模型可解释的变量和可预测度,可对模型的优劣进行判别(详见图5),实验中的OPLS-DA模型的R2Y和Q2分别是99%和98%,表示模型有良好的可解释能力和可预测分组能力。通过模型分析对代谢物进行VIP打分筛选,VIP分数越高的代谢物,对分组的贡献越大,本实验选取VIP>1、P value<0.05的代谢物为差异代谢物。
[0137] 5、结果
[0138] 经过数据分析发现,代谢物LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))在空白对照组和模型组、治疗组和模型组间存在显著性差异,而在空白对照组和治疗组之间则无显著性差异,相比空白对照组,模型组中的LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))的含量显著增加,约增加3.68倍,相比模型组,治疗组中的LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))的含量显著降低,约降低2.95倍,说明LysoPE(0:0/18:3(6Z,9Z,12Z))可作为标志物指示胰腺炎的发生,同时可以作为药物治疗有效性的监测指标,应用于药物治疗胰腺炎的效果判断。
[0139] 上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

与急性胰腺炎相关的代谢标志物委托购买说明

填写需求表单支付预付款

平台根据需求优化购买方案

确认购买方案支付尾款

平台办理变更等待成功通知

与急性胰腺炎相关的代谢标志物购买流程说明

发起委托,需要先支付100元预付款,委托不成功,全额退返预付款;

平台收到需求后,会联系您,给到您购买方案;

您在确认购买方案后,需支付全额专利购买费,预付款可抵扣购买费,专利购买费具体参见下方表格;

平台确认收款后,将帮您办理专利购买、专利过户等全流程手续;

平台代购专利失败,将全额退返专利购买费,包括预付款;

与急性胰腺炎相关的代谢标志物专利购买费用

授权未缴费=专利裸价+著录项变更(200元)+登办费(当年年费+5元印花税)+恢复权利请求费1000元(按实收)+委托服务费(200元)+税金(专利裸价+委托服务费)x6%

已下证=专利裸价+著录项变更(200元)+滞纳金(按实收)+恢复权利请求费1000元(按实收)+委托服务费(200元)+税金(专利裸价+委托服务费)x6%

与急性胰腺炎相关的代谢标志物购买费用说明

专利转让费用

专利买卖交易资料

Q:办理专利转让的流程及所需资料

A:专利权人变更需要办理著录项目变更手续,有代理机构的,变更手续应当由代理机构办理。

1:专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2:按规定缴纳著录项目变更手续费。

3:同时提交相关证明文件原件。

4:专利权转移的,变更后的专利权人委托新专利代理机构的,应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。更多

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A:(1)直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,(2)通过代办处缴纳,(3)通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q:专利转让变更,多久能出结果

A:著录项目变更请求书递交后,一般1-2个月左右就会收到通知,国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。

更多专利转让常见问题

动态评分

0.0

没有评分数据
没有评论数据
 
X 顶部大图